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显微镜镜象亮度以及视野大小的关键所在
镜象亮度指的是显微镜中所看到的物象的亮暗程度。要看清楚物体的细节,必须要求一定的亮度,也就是镜象亮度,它与数值孔径的平方成正比,与总放大倍数的平方成反比。在物镜相同的情况下,使用5X的目镜比使用10X的目镜,镜象亮度要大四倍,所以要想使镜象亮度大,可以使用大数值孔径的物镜,配以低放大倍数的目镜。
比方说,使用40X的N.A.为0.65的物镜配以5X的目镜和使用10x的N.A.为0.25的物镜配以20X的目镜相比较,虽然总放大率都是200X,可是前者的镜象亮度比后者大六点八倍。在实际观察物体的时候,并不是镜象越亮越好,假如镜象亮度太大,一通过标本的光线太强,会影响图象的反差且不利于保护眼睛视力,因此要求将镜象亮度调至适中,同时根据不同标本厚度加以调节,对于厚的标本可以适当增加亮度,反差好的标本也可适当增加亮度。
而且所谓的视野指的是是视场,说白了就是显微镜一次所能观察到被检标本的范围。通常来讲显微镜的视野是很小的,它的大小和显微镜的总放大倍数成反比,总放大倍数越大的时候,显微镜的视野越小。所以显微镜尤其是高放大倍数情况下,不可能在一个视野内看到整个标本,只能观察到标本的某个部位。假如需妥观察标本的其他部位的时候,一定要利用移动器移动标本,使标本中的各部分依次进入视野内,轮流观察。
光学显微镜的几个主要性能之间有着一定的相互关系。是不是看清楚小的物体或细节,主要决定于物镜的分辨率,也就是数值孔径,并不决定于倍数,认为倍数越高看得越清楚的想法是不完全正确的。假如不增高分辨率。只是尽量增大倍数,虽然能够获得更高的放大倍数的图象,可是并不可能看出更多的细节,这种放大叫做“空的放大”。为了充分利用物镜的分辨率,显微镜的总放大倍数相应也不能太小,不然的话本来可以看清楚的一些物体细节,会因为总放大倍数过小,挤在一起而分辨不出。
同一物镜分辨率随放大倍数增大而提高,随倍数减小而降低,例如数值孔径为0.65的物镜,在总放大倍数小于一百六十倍的时候,分辨率降为7微米,当总放大倍数增至一千六百倍的时候,分辨率提高到1.6微米以上。
显微镜合适的总放大倍数决定于物镜数值孔径N.A.值的500倍至1000倍,假如N.A.值为0.65的40倍物镜,合适的总放大倍数应为0.65x500倍。0.65x1000即325倍至650倍。所以,为了达到合适的总放大倍数应配合适当倍数的目镜。
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